PCR EN LA TROMBOSIS CEREBRAL

Tema: ANÁLISIS MUTACIONAL DEL FACTOR V  DE LEIDEN, PROTROMBINA G20210A Y METILENTETRAHIDROFOLATO REDUCTASA C677T Y A1298C EN UNA MUESTRA DE PACIENTES CON SUSCEPTIBILIDAD A TROMBOFILIA.

Objetivo: Determinar la frecuenciade la mutación G1691A en el gen para el factor V (Factor V  de  Leiden), la  mutación  G20210A  del gen  del  Factor  II y los polimorfismosC677T  y  A1298C  de  la  enzima  metilentetrahidrofolato  reductasa y  establecer  su relación con la presencia de trombofilias.

Muestra biológica: muestra de sangre periférica

Tipo de ácido nucleico: ADN genómico extraído de las muestras de sangre periférica por el método de Salting Out  mediante la utilización del kit Wizard Genomic “DNA  Purification Kit” Cat A1125.

Gen a amplificar: FACTOR V G1691A,  FACTOR V G1691A, PROTROMBINA G20210A, MTHFR C677T Y A1298C

Tipo de PCR: PCR multiplex

Pasos:

GEN	CICLOS	DESNATURALIZACIÓN	APAREAMIENTO	EXTENSIÓN
Factor V G1691A (Factor V Leiden)	35 ciclos	Inicial: 94°C por 5 min Final: 94°C por 30 seg	57°C por 30 seg	Inicial:72°C por 30 seg Final: 10 min a 72°C
Factor II (Protrombina) G20210A	35 ciclos	Inicial: 94°C por 5 min Final: 94°C por 30 seg	57°C por 30 seg	Inicial:72°C por 30 seg Final: 10 min a 72°C
MTHFR C677T	33 ciclos	Inicial: 94°C por 3 min Final: 94°C 30 seg	59°C por 30 seg	Incial: 72°C por 30 seg Final: 3 min a 72°C
A1298C	35 ciclos	Inicial: 92°C por 2 min Final: 92°C por 60 seg	51° por 60 segundos	Inicial: 72°C por 30 seg Final: 72°por 7 min

Resultados:

• ·   Factor V de Leiden: heterocigosidad para la mutación en el 17%de los casos y 1.5% de los controles. No se registraron casos ni controles homocigotos para la alteración.
• ·   Protrombina G20210A: heterocigosidad para la mutación en el 1.6%de los casos y en ningún control.  No  se  registraron  casos  ni  controles  homocigotos  para  la  alteración.
• ·    MTHFR C677T: heterocigosidad para la mutación en el 52% de los casos y en el 50% de los controles. En este polimorfismo se registró homocigosidad en el 19% de los casos  y  en  el 24%  de  los  controles. 
• ·   MTHFR A1298C : heterocigosidad  en  el  28%  de  los casos y  en  el  20%  de  los  controles; la  homocigosidad para  la  mutación  se identificó en  el  4%  de  los casos y  el  5%  de  los  controles. 

Referencias bibliográficas: 

• Referencia 1