TERAPIA GÉNICA EN ACCIDENTE CEREBROVASCULAR

TERAPIA GÉNICA 

La terapia génica es un tratamiento alternativo a los abordajes farmacológicos, quirúrgicos y de índole convencional que se están desarrollando tanto en investigación básica como clínica. Principalmente, consiste en la modificación específica de un gen para prevenir, o remediar, una condición patológica para el organismo. Esta técnica se basa en la interferencia, corrección o sustitución del gen defectuoso dentro de las células que expresan la patología por el gen normal y su correcta proteína funcional de manera de retardar, estabilizar o revertir el curso de la enfermedad  

Terapia Génica en Accidente Cerebrovascular 

Tema: EXPRESIÓN GÉNICA DIFERENCIAL DE HIPOCAMPO EN UN MODELO DE ENVEJECIMIENTO CEREBRAL TRATADO CON TERAPIA GÉNICA DE LARGO PLAZO

Tipo de terapia: Adición génica in vivo

Dirigido hacia: gen del insulin-like growth factor I (IGF-I)

Dirigido por: adenovector helper-dependent (HD) de última generación

Sujetos experimentales: Se utilizaron 30 ratas hembra de 24 meses, las cuales fueron divididas aleatoriamente en 3 grupos: intactas, IGF-I (inyectadas con vector para IGF-I), DsRed (inyectadas con un vector placebo).

Órgano, sistema, tejido célula: Sistema Nervioso Central, Neuronas dopaminérgicas y colinérgicas 

Vía de administración: Inyección estereotáxica intracerebroventricular (icv) de adenovirus recombinantes

Resultados: Los 3 grupos de ratas viejas mostraron un buen aprendizaje del paradigma de Barnes y no mostraron diferencias significativas en la preferencia por la región meta en los probe trials previos a la cirugía y los desafíos un mes después de la misma.

Conclusiones: La terapia génica neuroprotectora a largo plazo con IGF-I mejora la memoria espacial de corto plazo en nuestro modelo de rata vieja según lo observado en el análisis de test cognitivos. A nivel génico esta mejora podría deberse a la expresión de genes específicos vinculados a proceso de regeneración tisular y respuesta inmune.

Referencias bibliográficas: 

• Referencia 1
• Referencia 2 

TERAPIA CON STEM CELLS

Terapia con Stem Cell en ICTUS

Aplicación de células mesenquimales autólogas como ayudante en el tratamiento de embolia cerebral

Los embolismos afectan a una de cada seis personas en el mundo y son una de las principales causas de discapacidad en gente productiva. Este accidente cerebrovascular es considerado un infarto en el cerebro ocasionado después de una lesión vascular. La isquemia cerebral resultante puede producir serias repercusiones en el desempeño y en la relación entorno-paciente de los individuos afectados.

Tipo de stem cell: células autólogas mesenquimales

Método de obtención: Expresión de factores de crecimiento que producen y la capacidad que tienen estas células para diferenciarse de un linaje funcional que ayudará a la regeneración de los tejidos lesionados.

Reprogramación de factores

Usos: recuperación funcional casi en su totalidad, regeneración de tejido neuronal e inhibiendo los efectos del proceso inflamatorio, tratamiento para embolismos

Resultados: Corto plazo: síntomas se mantuvieron por un mes. Al término se recupera casi en su totalidad, con Brunnstrom 2--> 5. Largo plazo: a un año después Brunnstrom 6. Quedaron secuelas mínimas como discreta disfagia.

Terapia con Stem cell : uso de células autólogas mesenquimales como tratamiento para embolismos

Fundamento: factores de crecimiento que producen y la capacidad que tienen estas células para diferenciarse de un linaje funcional que ayudará a la regeneración de los tejidos lesionados.

Resultado = recuperación funcional casi en su totalidad.

Caso:

Varón de 60 años de edad

Diagnóstico: Infarto capsular talámico derecho.

Pronóstico: Diferido.

El tercer día : inocitol y manitol para preparar la implantación de células mesenquimales en el espacio subaracnoideo.

La terapia celular = neurorrehabilitación, y fisioterapia ocupacional

Conclusiones:

Con base en los resultados reportados, se puede fundamentar que es necesario aplicar la terapia ce- lular en la fase temprana del desarrollo del cuadro isquémico dado que el desenlace del paciente fue fa- vorable. En los casos crónicos es necesario llevar a cabo la evaluación del daño y posiblemente cambiar el procedimiento del tratamiento.

 Ver ahora: Deborah Zagone cuenta su experiencia de Tratamiento con Células Madre para ACV

NUEVO TRATAMIENTO LLAMADO AB126

Referencias bibliográficas: 

• Referencia 1
• Referencia 2

ADN RECOMBINANTE

ADN RECOMBINANTE

Es un tipo de ADN formado por la unión de dos moléculas de diferente origen. Se distingue entre el ADN recombinante natural, y el ADN recombinante sintético.

EJEMPLO DE ADN RECOMBINANTE EN LA NATURALEZA

Se debe recordar que la transformación es un proceso por el cual las células captan DNA, constituyendo un fenómeno que ocurre de forma natural en muchas bacterias, pero la eficacia del proceso varía enormemente de unas especies a otras. Para que la transformación tenga lugar, la bacteria tiene que encontrarse en el llamado estado de competencia, que ocurre en determinadas condiciones fisiológicas; en este estado, la bacteria presenta alteraciones en su pared y membrana celulares, que permiten la entrada de ácidos nucleicos en la célula. Un ejemplo es la introducción de un plásmido recombinante obtenido en una reacción de ligación en la estirpe de Escherichia coli DH5α.

Entre otros ejemplos tenemos:

EPISOMAS, en bacterias después de una conjugación, al ceder una cadena monocatenaria de material extracromosómico (PLÁSMIDO) a una bacteria carente de este, que finalmente termina en la agregación al cromosoma circular del organismo procarionte.

CROSSING OVER, en la Meiosis cuando las cromátides HOMÓLOGAS (de cromosomas paterno y materno) se intercambian.

INTERCAMBIO DE CROMÁTIDES HERMANAS, en la Mitosis cuando las cromátides HERMANAS (de un único cromosoma) intercambian fragmentos de su material genético.

El ADN recombinante difiere de la RECOMBINACIÓN GENÉTICA en que no ocurre dentro de la célula, sino más bien por procedimientos in vitro utilizando secuencias de genes de 2 o más individuos.

ADN RECOMBINANTE ARTIFICIAL EN TROMBOSIS CEREBRAL

Eritropoyetina humana recombinante e isquemia aguda cerebral

La eritropoyetina es una hormona producida principalmente en el riñón en respuesta a la hipoxia, y de de forma constitutiva en hígado, neuronas y retina. 

El mecanismo molecular por el cual se estimula su producción es a través de los factores inducibles por la hipoxia. Estos se activan a partir de sensores de la membrana celular y disparan señales moleculares, que activan la replicación de genes que intervienen en la síntesis de la molécula.

En modelos experimentales de isquemia cerebral ha sido observada una fuerte regulación positiva de la EPO y sus receptores en el cerebro que ha sufrido dicha isquemia, lo cual pone de relieve su potencial efecto neuroprotector.

Activador de plasminógeno de tejido recombinante (rt-PA)

rt-PA es una forma genéticamente producida de t-PA, una sustancia trombolítica y anticoagulante, fabricada naturalmente por el cuerpo.Los agentes trombolíticos se utilizan para tratar un accidente cerebrovascular isquémico agudo, mientras que éste se está produciendo, ocasionado por un bloqueo arterial. Estos medicamentos detienen el accidente cerebrovascular disolviendo el coágulo de sangre que está bloqueando el flujo de la sangre al cerebro. 

Referencias bibliogràficas:

• Referencia 1
• Referencia 2 

PRUEBA DE MICROARRAY EN LA TROMBOSIS CEREBRAL

Ahora está disponible un microarray para el diagnóstico molecular de la trombofilia y la farmacogenética de la warfarina. El ADN obtenido del análisis se obtiene de la sangre periférica, el esputo o los exudados bucales. 

La tecnología de microaarays diseñada, incluye nueve mutaciones asociadas al riesgo de trombofilia: Factor V Leiden, Factor II G20210A, Metilentetrahidrofolato reductasa (MTHFR) C677T, MTHFR A1298C, inhibidor del activador del plasminógeno (PAI )4G/5G, PAI -844 A>G, gen de la enzima convertidora de la angiotensina-I (ACE), Ins/Del, Beta Fibrinógeno -455G>A, Factor XIII Val34Leu y tres mutaciones implicadas en la farmacogenética de la warfarina: Citocromo P450 2C9 (CYP2C9) y el complejo 1 de la reductasa epóxido de la vitamina K (VKORC1).

Utilizando la tecnología de microarrays, este análisis permite detectar simultáneamente 12 mutaciones descritas en las trombofilias hereditarias y 3 mutaciones para la componente genética de la respuesta individual a una terapia anticoagulante con dicumarínicos (warfarina).

Referencias bibliogràficas:

• Referencia 1
• Referencia 2 

PCR EN LA TROMBOSIS CEREBRAL

Tema: ANÁLISIS MUTACIONAL DEL FACTOR V  DE LEIDEN, PROTROMBINA G20210A Y METILENTETRAHIDROFOLATO REDUCTASA C677T Y A1298C EN UNA MUESTRA DE PACIENTES CON SUSCEPTIBILIDAD A TROMBOFILIA.

Objetivo: Determinar la frecuenciade la mutación G1691A en el gen para el factor V (Factor V  de  Leiden), la  mutación  G20210A  del gen  del  Factor  II y los polimorfismosC677T  y  A1298C  de  la  enzima  metilentetrahidrofolato  reductasa y  establecer  su relación con la presencia de trombofilias.

Muestra biológica: muestra de sangre periférica

Tipo de ácido nucleico: ADN genómico extraído de las muestras de sangre periférica por el método de Salting Out  mediante la utilización del kit Wizard Genomic “DNA  Purification Kit” Cat A1125.

Gen a amplificar: FACTOR V G1691A,  FACTOR V G1691A, PROTROMBINA G20210A, MTHFR C677T Y A1298C

Tipo de PCR: PCR multiplex

Pasos:

GEN	CICLOS	DESNATURALIZACIÓN	APAREAMIENTO	EXTENSIÓN
Factor V G1691A (Factor V Leiden)	35 ciclos	Inicial: 94°C por 5 min Final: 94°C por 30 seg	57°C por 30 seg	Inicial:72°C por 30 seg Final: 10 min a 72°C
Factor II (Protrombina) G20210A	35 ciclos	Inicial: 94°C por 5 min Final: 94°C por 30 seg	57°C por 30 seg	Inicial:72°C por 30 seg Final: 10 min a 72°C
MTHFR C677T	33 ciclos	Inicial: 94°C por 3 min Final: 94°C 30 seg	59°C por 30 seg	Incial: 72°C por 30 seg Final: 3 min a 72°C
A1298C	35 ciclos	Inicial: 92°C por 2 min Final: 92°C por 60 seg	51° por 60 segundos	Inicial: 72°C por 30 seg Final: 72°por 7 min

Resultados:

• ·   Factor V de Leiden: heterocigosidad para la mutación en el 17%de los casos y 1.5% de los controles. No se registraron casos ni controles homocigotos para la alteración.
• ·   Protrombina G20210A: heterocigosidad para la mutación en el 1.6%de los casos y en ningún control.  No  se  registraron  casos  ni  controles  homocigotos  para  la  alteración.
• ·    MTHFR C677T: heterocigosidad para la mutación en el 52% de los casos y en el 50% de los controles. En este polimorfismo se registró homocigosidad en el 19% de los casos  y  en  el 24%  de  los  controles. 
• ·   MTHFR A1298C : heterocigosidad  en  el  28%  de  los casos y  en  el  20%  de  los  controles; la  homocigosidad para  la  mutación  se identificó en  el  4%  de  los casos y  el  5%  de  los  controles. 

Referencias bibliográficas: 

• Referencia 1

PRUEBA DE TAMIZAJE Y CONFIRMATORIA DE TROMBOSIS CEREBRAL

PRUEBA DE TAMIZAJE: PRUEBAS DE COAGULACIÓN

Sin anticoagulante:       

·         Tiempo de coagulación

·         Tiempo de sangría

·         Retracción del coágulo

·         Prueba del torniquete

Con anticoagulante (citrato de sodio 3,8%)

·         Tiempo de protrombina

·         Tiempo parcial de tromboplastina

·         Tiempo de trombina

·         Fibrinógeno

·         Factores de la coagulación

·         Recuento de plaquetas

Prueba	Valores normales
Recuento de plaquetas	150 000 – 450000/ml
Tiempo de sangrado (Duke)	3 – 7 minutos
Tiempo de coagulación (Lee-White)	5 – 10 minutos
Tiempo de protrombina	10 – 14 segundos >60%
Razón Internacional normalizada	O,8 – 1,2
Tiempo de tromboplastina parcial activado	25 – 45 segundos
Tiempo de trombina	9 – 35 segundos
Tiempo de trombina	9 – 35 segundos
Fibrinógeno	200 – 400 mg/dL
Productos de degradación de fibrina	0,11 (<10 mg/mL)
Dímero D	<500 ng/mL

PRUEBA CONFIRMATORIA: ANGIORESONANCIA DEL CRÁNEO

La angioresonancia es un examen en el que se utiliza la resonancia magnética con el fin de obtener imágenes detalladas de los vasos sanguíneos, en este caso, del cráneo.

Con este estudio se pueden diagnosticar aneurismas en la aorta, enfermedad arterioesclerótica de las arterias carótidas en el cuello, enfermedades en los vasos sanguíneos del cerebro como pequeños aneurismas o malformaciones arteriovenosas, teniendo en cuenta que los vasos sanguíneos del cerebro llegan a tener diámetros menores al de un cabello humano, haciendo de este un estudio muy sensible a la hora de saber qué sucede con la circulación sanguínea del cerebro.

Durante el examen se puede usar, o no, medio de contraste que se inyecta por una línea intravenosa, y que, junto al mismo resonador, son responsables de la sensibilidad y especificidad del estudio.

  

Referencias bibliográficas: 

• http://bdigital.unal.edu.co/22709/1/19358-63660-1-PB.pdf
• http://www.scielo.org.mx/pdf/apm/v37n4/2395-8235-apm-37-04-00241.pdf
• https://es.slideshare.net/edwin1211/pruebas-de-coagulacin
• https://www.grupogamma.com/procedimiento/angioresonancia-craneo/ 

ALTERACIÓN DE LA EPIGENÓMICA EN LA TROMBOSIS CEREBRAL

¿Existen factores ambientales que interactúan con la genética humana y provocan episodios trombóticos? Investigadores del hospital de Sant Pau de Barcelona y la compañía farmacéutica Stago pretenden responderlo a través de un mecanismo del organismo que regula la expresión de los genes (epigenética) a través del miRNA 146.

Un mi-RNA cuyos niveles se elevan con la edad y que ha mostrado protección cardiovascular es miR-146 por su acción anti inflamatoria, que logra al inhibir la producción de la proteína quinasa asociada al receptor de interleucinas, por lo que su disminución se puede interpretar como biomarcador de un estado proinflamatorio, factor de riesgo para la formación de trombos debida a la ruptura de una placa aterosclerótica y generar una  trombosis cerebral venosa. Este mi-RNA se manifiestan de forma distinta según el ambiente en el que estén sometidos (tabaquismo, obesidad u otros fármacos).

FACTORES DE RIESGO IDENTIFICADOS EN RELACIÓN CON LA TROMBOSIS VENOSA CEREBRAL

Factor de riesgo	N° (%) pacientes
Infección local	2 (3,8%)
Infecciones sistémicas	2 (3,8%)
Traumatismo craneoencefálico	2 (3,8%)
Cirugía hace menos de 1 mes	1 (1,9%)
Embarazo	2 (3,8%)
Post-aborto	1 (1,9%)
Abortos previos	2 (3,8%)
Uso de anticonceptivos orales (totales)	13 (25%)
Mujeres	13 (35,1%)
Cáncer	1 (1,9%)
Trombocitosis	2 (3,8%)
Anemia	5 (9,6%)
Poliglobulia	6 (11,5%)
Enfermedad inflamatoria intestinal	4 (7,6%)
Vasculitis (enfermedad de Behçet, lupus)	2 (3,8%)
Trombosis otra localización	5 (9,6%)
Drogas	1 (1,9%)
Hiperhomocisteinemia	4 (7,6%)
Anticuerpos antifosfolípido	2 (3,8%)
Trastorno de hipercoagulabilidad hereditario	14 (26,9%)
Aumento de factor VIII	1 (1,9%)
Déficit de proteína S	2 (3,8%)
Déficit de factor II	1 (1,9%)
Factor V de Leiden	2 (3,8%)
Mutación G20210A de la protrombina	4 (7,6%)
Mutación C667T de la MTHFR	4 (7,6%)
Déficit de antitrombina III	0 (0,0%)

Referencias Bibliográficas: 

• http://www.redalyc.org/html/1805/180546208007/
• http://www.elsevier.es/es-revista-neurologia-295-articulo-influyen-los-factores-riesgo-trombosis-S0213485310002756 
• http://www.seth.es/index.php/congresos/congresos-seth/ponencias-y-simposios-seth/2013.html